中性粒細(xì)胞堿性磷酸酶染色液(NAP)采用原理

中性粒細(xì)胞堿性磷酸酶染色液(NAP)采用原理

簡介：

堿性磷酸酶(Alkaline phosphatase，簡稱ALP或AKP)是一類于哺乳動物組織內(nèi)廣泛分布的磷酸酯酶，其活性在pH 9.2~9.8范圍內(nèi)最佳。它主要存在于附睪上皮之靜纖毛、腸上皮和腎近曲小管的刷狀緣、肝的毛細(xì)膽管膜、微動脈和毛細(xì)血管動脈部之內(nèi)皮等物質(zhì)交換活躍之處(細(xì)胞膜)，還可以出現(xiàn)在高爾基復(fù)合體、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)、腸上皮之溶酶體、吞飲小泡、中性粒細(xì)胞之中性顆粒以及平滑肌之細(xì)胞膜。

中性粒細(xì)胞堿性磷酸酶染色液(NAP) 采用偶氮偶聯(lián)法(又稱同時偶聯(lián)法)，而不是采用金屬沉淀法來顯示其堿性磷酸酶的活性，它作用原理是在pH9.2～9.8的堿性條件下，細(xì)胞內(nèi)堿性磷酸酶可以通過水解AB-BI磷酸鹽，從而釋放出萘酚與磷酸，前者與偶聯(lián)重氮鹽可以生成有色產(chǎn)物，定位于細(xì)胞質(zhì)中。該染液專門用于骨髓細(xì)胞或血液涂片的中性粒細(xì)胞的堿性磷酸酶染色, 堿性磷酸酶活性部位位于胞槳，呈藍(lán)色，結(jié)果比金屬鹽沉淀法更可靠。

儲存條件：

6個月有效。

自備材料：

1、 載玻片

2、 多聚甲醛（4%）

3、 顯微鏡

操作步驟(僅供參考)：

(一)、涂片

1、通過NAP固定液固定，制備新鮮血液或骨髓細(xì)胞涂片，充分水洗。

2、滴加準(zhǔn)備好的NAP孵育液，孵育及水洗。

3、滴加甲基綠染色液或核固紅染色液復(fù)染。水洗、晾干后鏡檢。

(二) 貼壁培養(yǎng)細(xì)胞

1、準(zhǔn)備其他容器或6孔板培養(yǎng)的細(xì)胞，棄液，使用PBS清洗干凈。

2、使用NAP固定液或多聚甲醛進(jìn)行固定，PBS清洗。

3、滴加配制好的NAP孵育液，置于濕盒內(nèi)，避光孵育，PBS清洗。

4、加入甲基綠染色液或核固紅染色液復(fù)染。使用PBS清洗后鏡檢。