標(biāo)準(zhǔn)曲線的常識

標(biāo)準(zhǔn)曲線的常識

每次開機(jī)都必須做標(biāo)準(zhǔn)曲線？


從檢測的要求來說，因為：

1、每天所配的流動相都會有所不同，導(dǎo)致出峰的時間都會有一定的差異，峰面積相應(yīng)都有所差異。


2、檢測器光能也在不斷的衰弱，因此其每天的相應(yīng)值也有所不同，其峰面積也有差異。


基于以上原因，原則上應(yīng)該是每天都要進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)曲線校正的。



標(biāo)準(zhǔn)曲線不要每次都做，但是每次必須進(jìn)標(biāo)準(zhǔn)品樣品；因為每次你的流動相和原來的不可能*一樣，同時儀器的狀態(tài)也在變化，所以不同批次間的保留時間是不一致的，所以你必須用隨行標(biāo)準(zhǔn)品來定位與定量。




校準(zhǔn)曲線能不能使用？


每批樣品應(yīng)測定一個校準(zhǔn)曲線中間點(diǎn)濃度的標(biāo)準(zhǔn)液，其測定濃度與校準(zhǔn)曲線標(biāo)準(zhǔn)點(diǎn)的濃度相對誤差不得超過規(guī)定范圍，如果超過規(guī)定相對誤差，需重新繪制校準(zhǔn)曲線。



也可以這樣說，不同的分析項目,不同的分析方法,校準(zhǔn)曲線斜率的穩(wěn)定性不同。如校準(zhǔn)曲線的斜率較為穩(wěn)定,則在樣品分析時,可只測定兩個標(biāo)準(zhǔn)點(diǎn),當(dāng)此兩個標(biāo)準(zhǔn)點(diǎn)與原曲線相應(yīng)點(diǎn)的相對偏差均小于5%時,可使用原校準(zhǔn)曲線。因此,樣品分析前,需根據(jù)斜率的穩(wěn)定性來確定是否需同時制作校準(zhǔn)曲線。



我們一般的做法是，根據(jù)檢測的頻率來做，如果該項目天天都要檢測，并且檢測量較多時，要求至少每周做一次曲線。如果檢測量上，一個月都沒有幾單的話，就一個月做一次曲線。當(dāng)然，儀器如果出現(xiàn)故障并大修后回來的，經(jīng)過檢定后，需要重新做曲線。




標(biāo)準(zhǔn)曲線是否必須過原點(diǎn)？


標(biāo)準(zhǔn)曲線不一定非要過原點(diǎn)，只要線性好就可以了。因為做空白的話基本上不會過原點(diǎn)。過原點(diǎn)是強(qiáng)制過的，實際曲線可能不過，就會造成誤差。不過原點(diǎn)是因為有系統(tǒng)誤差。



針對是否過原點(diǎn)(0,0)問題，我想可以從原點(diǎn)(0,0)代表的意義來考慮：

即所測組分濃度為零的時候，信號響應(yīng)值（液相色譜也就是峰高或者峰面積）是否也為零。通常來說色譜分析是屬于這種情況的，因而可以把（0,0）點(diǎn)作為一個濃度水平計入標(biāo)準(zhǔn)曲線（甚至不需要真的去配一個濃度為零的標(biāo)準(zhǔn)溶液來進(jìn)樣），這也是單點(diǎn)法定量的一個依據(jù)；而類似的情況在光譜法測定時就講不通了，濃度為零的標(biāo)準(zhǔn)溶液（本底）響應(yīng)信號（吸光度）往往不是零，這個時候標(biāo)準(zhǔn)曲線就不一定過原點(diǎn)了。




標(biāo)準(zhǔn)曲線的線性范圍？


線性范圍這個大家都比較清楚，主要從相關(guān)系數(shù)r看，一般要求r大于等于三個九。之前做實驗有時候濃度高時，線性不好，高濃度點(diǎn)不在標(biāo)準(zhǔn)曲線上，而是在標(biāo)準(zhǔn)曲線的下面，而且離擬合的標(biāo)準(zhǔn)曲線比較遠(yuǎn)。遇到這種情況，標(biāo)準(zhǔn)曲線的線性相關(guān)系數(shù)就很差，有時候才一個九，后我終于想明白了，如果自己用手動擬合的話，用平滑的曲線去連接所有點(diǎn)的話，你就會發(fā)現(xiàn)，如果在線性范圍內(nèi)，連接起來就是直線，如果超出了線性范圍，連接起來就是一條彎曲的曲線。







相關(guān)系數(shù)的有效數(shù)字？


GB5750.3-2006 8.2.7項有如下規(guī)定：校準(zhǔn)曲線相關(guān)系數(shù)只舍不入，保留到小數(shù)點(diǎn)后出現(xiàn)非9的一位，如0.99989→0.9998。如果小數(shù)點(diǎn)后都是9時，多保留小數(shù)點(diǎn)后4位。





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Y=bX和二次曲線的選用？


標(biāo)準(zhǔn)曲線我們通常采用的是Y=a+bX，曲線擬合完必須要做統(tǒng)計檢驗，且要做統(tǒng)計完備的線性檢驗和失擬檢驗，然后再做a與0的差別檢驗，如果a與0的統(tǒng)計學(xué)上無差異，你就可以考慮用Y=bX的擬合曲線，擬合出來后同樣做線性檢驗和失擬檢驗，如果線性檢驗合格（P<0.05）且失擬檢驗合格（p>0.05）此時你就可以采用Y=bX。



二次曲線的采用同樣是這樣的道理，如果你Y=a+bX時擬合不合格，你就考慮用Y=a+bX+cX2，同樣做失擬檢驗，考察擬合的符合情況。如果Y=a+bX 和Y=a+bX+cX2都滿足擬合檢驗和失擬檢驗合格，則采用Y=a+bX形式，這樣符合統(tǒng)計學(xué)上參數(shù)少的統(tǒng)計簡潔性原則。



標(biāo)準(zhǔn)曲線法有一定的優(yōu)勢，也有一定的缺陷，它特別適合于大量樣品的分析。但由于每次樣品分析的色譜條件（檢測器的響應(yīng)性能，柱溫，流動相流速及組成，進(jìn)樣量，柱效等）很難*相同，因此容易出現(xiàn)較大誤差。此外，標(biāo)準(zhǔn)工作曲線繪制時，一般使用欲測組分的標(biāo)準(zhǔn)樣品（或已知準(zhǔn)確含量的樣品），而實際樣品的組成卻千差萬別，因此必將給測量帶來一定的誤差。



了解各個分析項目校準(zhǔn)曲線斜率的穩(wěn)定性及影響穩(wěn)定性的主要因素,可決定是否能采用帶標(biāo)點(diǎn)檢驗原校準(zhǔn)曲線,省略重新制作校準(zhǔn)曲線;從校準(zhǔn)曲線斜率的變化,可判斷標(biāo)準(zhǔn)溶液的穩(wěn)定性,從而確定其標(biāo)定周期;分析低濃度樣品時,應(yīng)使用高純度的水和試劑,以減少空白值,降低樣品的分析誤差。