細(xì)胞內(nèi)鐵離子檢測原理！

細(xì)胞內(nèi)鐵離子檢測原理！

鐵是人體必需的元素之一，對人體的新陳代謝和身體健康具有重要作用，血液中鐵的含量不足，就 會造成缺鐵性貧血。鐵存在于人體所有的細(xì)胞內(nèi)，各組織、器官包括各內(nèi)分泌腺都含有鐵。肝臟、脾臟和 肺組織內(nèi)含量較為豐富。成人體內(nèi)含鐵 3～5 克，大部分都以蛋白質(zhì)復(fù)合物形式存在，極少部分以離子的 形態(tài)存在。本試劑盒采用亞鐵嗪比色法可以定量細(xì)胞鐵離子，線性范圍 5~300uM。產(chǎn)品包括標(biāo)準(zhǔn)品和空 白對照，本試劑盒可進(jìn)行 100 個樣品的檢測。

產(chǎn)品名稱：細(xì)胞內(nèi)鐵離子檢測試劑盒

規(guī)格：100T

儲存：4℃保存

有效期：6個月

實驗步驟：

1. 樣品準(zhǔn)備（以 24 孔板為例）： 將含鐵元素 DMEM 培養(yǎng)過的細(xì)胞用冷的 PBS 2ml 洗兩遍，將 PBS 吸棄（若不馬上檢測可將其凍存于 -20℃）。200ul/孔裂解液裂解細(xì)胞，置于搖床裂解 2h。

2. 標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋：用試劑盒提供的稀釋用液將 3mM 的標(biāo)準(zhǔn)品母液稀釋為：300 uM、150uM、75uM、 37.5uM、18.75uM、9.38uM、4.69uM。注意倍比稀釋并設(shè)置 0 濃度對照反應(yīng)管。

3. 將緩沖液與 4.5%高錳酸鉀溶液按 1:1 混勻，稱為混液 A。 注意：高錳酸鉀溶液需要自備。

4. 參考下表使用 1.5ml 離心管，設(shè)置空白對照管、標(biāo)準(zhǔn)品管和樣品管。如果樣品中的鐵元素含量過高， 用裂解液適當(dāng)稀釋后再進(jìn)行測定。

                                  空白對照                 稀釋后的標(biāo)準(zhǔn)品             裂解的樣品

    稀釋用液                100μl                             －

   混液 A                     100μl                           100μl                         100μl

   樣品                          －                                －                              100μl

   標(biāo)準(zhǔn)品工作液            －                                100μl                           －

    5. 混勻，60℃ 孵育 1h。 

    6. 冷卻至室溫，將管蓋與管壁上的液滴離心入管底。 

    7. 加入 30ul 鐵離子檢測劑，混勻，室溫孵育，30min。

    8. 取 200ul 于 96 孔板，在 550nm 測定吸光度。如果不能測定 550nm，也可以在 540nm~580nm 范圍內(nèi)檢測。 

    9. 繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線并計算鐵離子濃度。

注意事項：

1.操作過程中，樣品與試劑等避免與鐵器接觸，以防污染。

2.為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作，檢測試劑有腐蝕性，請小心操作，若不慎沾到 皮膚上請馬上用清水沖洗干凈。

3.本產(chǎn)品僅供科研實驗用，不做其它用途！