膽固醇檢測服務(wù)

標(biāo)題：膽固醇檢測服務(wù)

產(chǎn)品概述

一、原理

當(dāng)固醇類化合物與酸作用時(shí)，可脫水并發(fā)生聚合反應(yīng)，產(chǎn)生顏色物質(zhì)。因此可先對食品樣品進(jìn)行皂化和提取，用硫磷鐵試劑作為顯色劑，測定食品中膽固醇的含量。
    在樣品的冰乙酸提取液中加磷硫鐵試劑，膽固醇與試劑反應(yīng)產(chǎn)生紫紅色化合物，顏色的深淺與膽固醇的量成正比，可用分光光度計(jì)在波長560nm處測定。

二、實(shí)驗(yàn)儀器及試材
1.儀器：分光光度計(jì)、水浴鍋
2.試劑：本實(shí)驗(yàn)用水均需用蒸餾水或去離子水。試劑純度均為分析純。
（1）石油醚（沸點(diǎn)30-60℃）、無水乙醇、冰乙酸。
（2）50%氫氧化鉀溶液：稱取50g氫氧化鉀，用蒸餾水溶解，并稀釋至100mL。
（3）25%氯化鈉溶液：稱取25g氯化鈉，用蒸餾水溶解，并稀釋至100mL。
（4）10%三氯化鐵溶液：將10gFeCl3·6H2O溶于磷酸中，定容至100mL，儲于棕色瓶中，冷藏保存。
（5）磷硫鐵試劑：取10%三氯化鐵溶液1.5mL于100mL棕色容量瓶內(nèi)，加濃硫酸定容至刻度。
（6）膽固醇標(biāo)準(zhǔn)儲液：準(zhǔn)確稱取膽固醇100mg，溶于冰乙酸中，定容至100mL。
（7）膽固醇標(biāo)準(zhǔn)溶液：臨用前將儲液用冰乙酸稀釋10倍。

三、實(shí)驗(yàn)方法與步驟
1.樣品膽固醇提取
準(zhǔn)確稱取充分混勻的雞蛋約0.20g于25mL具塞比色管中，加入0.5mL50%氫氧化鉀溶液和4.5mL無水乙醇，振蕩混勻，在80℃恒溫水浴中皂化20min。皂化時(shí)每隔5min振搖一次使皂化*。皂化完畢，取出比色管，冷卻。加入3mL25%氯化鈉溶液后再加入10mL石油醚，蓋緊玻璃塞，振搖1min，靜置分層。
    取上層石油醚液1mL，置于25mL具塞比色管內(nèi)，在65℃水浴中讓石油醚自然揮發(fā)干，加入4mL冰乙酸，輕搖使膽固醇溶解，待測。
2.樣品和標(biāo)準(zhǔn)膽固醇含量測定另取兩支25mL具塞比色管，一支（空白管）加入4mL冰乙酸，一支（標(biāo)準(zhǔn)管）加入1mL膽固醇標(biāo)準(zhǔn)溶液（0.1mg/mL）和3mL冰乙酸。包括樣品管，各管分別加入2mL磷硫鐵試劑，混勻，25℃放置20min后在560nm波長下比色。以空白管調(diào)零，測得吸光度。

四、計(jì)算

雞蛋膽固醇（mg/100g）=A樣/A標(biāo)╳0.025mg/mL╳4mL╳10mL/1mL╳100/M樣g
                   =A樣/A標(biāo)╳100/M樣（mg/100g）

五、實(shí)驗(yàn)注意事項(xiàng)
濃硫酸、強(qiáng)堿溶液具有腐蝕性，小心操作。